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Exigences Concernant les Échantillons

 
 

Analyse de Polymorphisme de la Longueur des Fragments

 

Comment préparer vos échantillons pour l'analyse de la longueur des fragments

Volume:
min. 10 µl par échantillon disposés dans une plaque à 96 puits.
 
 
Le protocole suivant peut être utilisé pour préparer la plaque prête à charger :
  • Diluer votre size standard 1:100 avec du formamide Hi-Di
  • Distribuer le mélange standard/formamide de 10 µl dans une plaque 96 puits compatible avec un ABI3730 (catalogue 4titude n° 4ti-0730/C-SBC)
  • Diluez votre produit PCR, par exemple 1:2-1:100, pour obtenir l'intensité de signal souhaitée
  • Ajouter 1,2 µl de produit PCR dilué au 10 µl de mélange standard/formamide
  • Les puits vides doivent être remplis d'eau distillée.
Plaques à 96 puits ABI3730XL prêtes à charger :
FrameStar 96, avec Upstand 4ti-0730/C-SBC
 
 
Lorsque vous envoyez des produits PCR étiquetés et que Microsynth ajoute la size standard, vous pouvez choisir parmi les options suivantes :
GeneScan 120 LIZ
GeneScan 350 ROX
GeneScan 400 HD ROX
GeneScan 500 LIZ
GeneScan 500 ROX
GeneScan 600 LIZ
ILS 600 CXR
MapMarker 1000 ROX
GeneScan 1200 LIZ
 
Pour tout autre marqueur de taille, veuillez nous contacter.
 
 
Filter Sets
Dye Set Name Matrix Type Blue Green Yellow Red Orange
Powerplex_4C 4 dye FAM JOE TAMRA CXR  
Powerplex_4C-RCT 4 dye FAM JOE TAMRA CXR  
DS-30_D 4 dye 6-FAM HEX NED ROX  
DS-30_D-RCT 4 dye 6-FAM HEX NED ROX  
DS-02_E5 5 dye dR110 dR6G dTAMRA dROX LIZ
DS-02_E5-RCT 5 dye dR110 dR6G dTAMRA dROX LIZ
DS-33_G5 5 dye 6-FAM VIC NED PET LIZ
DS-33_G5-RCT 5 dye 6-FAM VIC NED PET LIZ
Mic-G5 5 dye FAM ATTO532 ATTO550 ATTO565 Dyomics630
Mic-G5-RCT 5 dye FAM ATTO532 ATTO550 ATTO565 Dyomics630
 
RCT : cet ensemble de Dyes réduit l'intensité du signal et le chevauchement potentiel des capillaires. Des pics de concentration plus élevés peuvent être utilisés sans déréglage.
 
 
Le set de filtres, la présence et le type de la size standard, doivent être déclarés lors de la commande et relèvent de la responsabilité du client.
 

 

Cell Line Authentication



Cell Pellets
Collect 1 to 5 Mio cells and wash the cell pellet twice in PBS or another appropriate buffer. Resuspend cell pellet in 0.5 ml of 70-90% ethanol and transfer to a 1.5 ml screw cab tube.

Isolated DNA
Please provide ≥50 µl of 50 ng/µl gDNA in Tris or low-EDTA buffer (10 mM Tris, 0.1 mM EDTA).

Culture Supernatant for Mycoplsma Testing
Please send 1 ml of the culture supernatant (w/o antibiotics, at least used for 3 days).


Mycoplasma Testing



Cultivez les cellules pendant au moins trois jours (72 h) sans modifier le milieu avant de recueillir le surnageant pour le test de mycoplasmes. Atteignez une confluence de 80 à 90 %, mais pas plus, afin d'éviter une inhibition potentielle.


Échantillonnage :

  • À partir de culture cellulaire adhérente : recueillez le surnageant directement à partir du flacon de culture.
  • À partir de culture en suspension : recueillez les cellules au fond du tube avant de retirer le surnageant. Assurez-vous que le surnageant est exempt de cellules en centrifugeant un sous-échantillon.
  • Recueillez 1000 μl du surnageant sans cellules dans un tube à bouchon à vis ou un récipient similaire offrant une fermeture hermétique pendant l'inactivation thermique.
  • Centrifugez l’échantillon à 750 x g pendant 2 minutes pour obtenir un culot des cellules et des débris cellulaires restants.
  • Transférez 150 µl du surnageant dans un nouveau tube de 1,5 ml avec un bouchon à clapet.
  • Inactivation thermique : Incubez le tube contenant le surnageant à 95°C pendant 10 minutes.
  • Étiquetez le tube avec une étiquette de code-barres Microsynth Mycoplasma. L’étiquette peut être obtenue dans la boutique en ligne.