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Anforderungen an Proben

 
 

Fragmentlängenanalyse

 
So bereiten Sie Ihre Proben für die Fragmentlängenanalyse vor

Volumen:
min. 10 µl pro Probe angeordnet in einer 96-well Platte.
 
 
Das folgende Protokoll kann zur Vorbereitung der Ready-to-Load-Platte verwendet werden:
  • Verdünnen Sie Ihren Größenstandard 1:100 mit Hi-Di-Formamid
  • Verteilen Sie 10 µl Größenstandard/Formamid-Mischung in einer ABI3730-kompatiblen 96-Well-Platte (4titude-Katalognr. 4ti-0730/C-SBC)
  • Verdünnen Sie Ihr PCR-Produkt z.B. 1:2-1:100, um die gewünschte Signalintensität zu erreichen
  • Geben Sie 1,2 µl verdünntes PCR-Produkt zu 10 µl Größenstandard/Formamid-Mix
  • Leere Wells müssen mit destilliertem Wasser befüllt werden.
Ready-to-Load ABI3730XL 96-Well-Platten:
FrameStar 96, mit Aufkantung 4ti-0730/C-SBC
 
 
Wenn Sie gelabelte PCR-Produkte senden und Microsynth den Grössenmarker hinzufügt, können Sie aus den folgenden Möglichkeiten wählen:
GeneScan 120 LIZ
GeneScan 350 ROX
GeneScan 400 HD ROX
GeneScan 500 LIZ
GeneScan 500 ROX
GeneScan 600 LIZ
ILS 600 CXR
MapMarker 1000 ROX
GeneScan 1200 LIZ
 
Für jeden anderen Grössenmarker kontaktieren Sie uns bitte.
 
 
Filter Sets
Dye Set Name Matrix Type Blue Green Yellow Red Orange
Powerplex_4C 4 dye FAM JOE TAMRA CXR  
Powerplex_4C-RCT 4 dye FAM JOE TAMRA CXR  
DS-30_D 4 dye 6-FAM HEX NED ROX  
DS-30_D-RCT 4 dye 6-FAM HEX NED ROX  
DS-02_E5 5 dye dR110 dR6G dTAMRA dROX LIZ
DS-02_E5-RCT 5 dye dR110 dR6G dTAMRA dROX LIZ
DS-33_G5 5 dye 6-FAM VIC NED PET LIZ
DS-33_G5-RCT 5 dye 6-FAM VIC NED PET LIZ
Mic-G5 5 dye FAM ATTO532 ATTO550 ATTO565 Dyomics630
Mic-G5-RCT 5 dye FAM ATTO532 ATTO550 ATTO565 Dyomics630
 
RCT: Dieser Farbstoffsatz reduziert die Signalintensität und das mögliche Übersprechen von Kapillaren. Es können höhere Konzentrationspeaks verwendet werden, ohne dass die Skala überschritten wird.
 
 
Filtersatz, Vorhandensein und Art des Größenstandards sollten bei der Bestellung angegeben werden und liegen in der Verantwortung des Kunden.
 

 

Zelllinien Authentifizierung


Zellpellets
Sammeln Sie 1 bis 5 Mio. Zellen und waschen Sie das Zellpellet zweimal in PBS oder einem anderen geeigneten Puffer. Resuspendieren Sie das Zellpellet in 0,5 ml 70-90%igem Ethanol und transferieren Sie es in ein 1,5 ml Schraubglas.

Isolierte DNA
Bitte stellen Sie ≥50 µl von 50 ng/µl gDNA in Tris- oder Low-EDTA-Puffer (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA) bereit.

Kulturüberstand für Mycoplsma-Tests
Bitte senden Sie 1 ml des Kulturüberstandes (ohne Antibiotika, mindestens 3 Tage lang verwendet).




Mycoplasma Testing



Züchten Sie die Zellen für mindestens drei Tage (72 Stunden), ohne das Medium zu verändern, bevor Sie den Überstand zur Mykoplasma-Testung sammeln. Lassen Sie die Zellen eine Konfluenz von 80 - 90 % erreichen, aber nicht darüber hinaus, um eine mögliche Inhibition zu vermeiden.


Probenahme:

  • Von adhärenten Zellkulturen: Sammeln Sie den Überstand direkt aus der Kulturflasche.
  • Von Suspensionskulturen: Sammeln Sie die Zellen am Boden des Tubes, bevor Sie den Überstand entfernen. Stellen Sie sicher, dass der Überstand zellfrei ist, indem Sie eine Teilprobe zentrifugieren.
  • Sammeln Sie 1000 μl des zellfreien Überstands in einem Schraubdeckelröhrchen oder einem ähnlichen Behälter, der einen dichten Verschluss während der Hitzeinaktivierung gewährleistet.
  • Zentrifugieren Sie die Probe bei 750 x g für 2 Minuten, um verbleibende Zellen und Zelltrümmer abzupelletieren.
  • Übertragen Sie 150 μl des Überstands in ein neues 1,5 ml Röhrchen mit Klappdeckel.
  • Hitzeinaktivierung: Inkubieren Sie das Röhrchen mit dem Überstand für 10 Minuten bei 95°C.
  • Beschriften Sie das Röhrchen mit einem Microsynth-Mykoplasma-Barcode-Etikett. Das Etikett kann im Webshop erworben werden.